teema: Alfaviiruste ja alpha-sarnaste viiruste replikaaskompleksite molekulaarne uurimine ja alfaviiruste genoomidel põhinevate multifunktsionaalsete geeniekspressioonivektorite arendamine.
tunnusnumber: ETF5055
projekti tüüp: Eesti Teadusfondi grant
erialad: 1.8. Molekulaarbioloogia
2.7. Bio- ja toiduainete tehnoloogia
seisund: lõppenud
asutus: Eesti Biokeskus
projekti juht: Andres Merits
kestus: 01.01.2002 - 31.12.2005
kirjeldus: Antud uurimuse eesmärgiks on uurida alfaviiruste (Semliki Forest virus - SFV) ja alfa-sarnaste viiruste (hepatiidi viirus E - HEV) molekulaarbioloogiat ja kasutada saadud tulemusi biotehnoloogias. Kavas on:
1. SFV replikaasikompleksi moodustumise ja SFV ja HEV replikaasvalkude struktuuride, funktsioonide ja interaktsioonide uurimine. Rekombinatsete valkude ekspersseerimise ja puhastamise abil iseloomustatakse seni suhteliselt vähe uuritud SFV ja HEV polümeraaskompleksi valkude ensümaatilised omadused. Funktsionaalselt aktiivsed domäänid ja järjestused iseloomustatakse sait-spetsiifilise mutageneesiga. Kasutades rakukultuure selgitatakse välja viirus-spetsiifiliste valkude ja nende mutatntsete variantide lokalisatsioonid nakatatud ja transfitseeritud rakkudes. Selle meetodiga täpsustatakse funktsioone, mida viiruse valgud infektsiooni käigus täidavad. Uurimise käigus saadud tulemustele põhinedes töödatakse välja test-süsteeme viirus-vastaste enhibiitorite testimiseks ja saadakse informatsiooni, mis on vajalik SFV genoomil põhineva ekspressioonivektori täiustamiseks.
2.SFV genoomil ja selle mittestruktuursel osal (replikonil) põhinevate vektorsüsteemide arendamine. Selleks et muuta SFV kaudu toimuv heteroloogiliste geenide ekspressioon lihtsalt reguleeritavaks ja kontrollitavaks identifitseeritakse SFV mutatsioonid, mis muudavad subgenoomse promooteri aktiivsuse sõltuvaks keskonna temperatuurist. Vastavate mutatsioonide sisseviimine olemas-olevatesse SFV-genoomil põhinevatesse ekspressioonivektoritesse võimaldab luua ekspressiooni-süsteemi, mille kaudu toimuv geeniekspressioon on kontrollitav ja mille abil saab eksporesseerida ka toksilisi valke. Peale selle planeeritakse kasutada SFV-l põhinevate vektorite täiustamiseks informatsiooni, mis pärineb SFV replikaasi valkude uurimisest. Vektorisse viiakse sisse selliseid replikatsioonivalkude geenide mutatsioone, mis vähendavad SFV toksilisust nakatatud rakkudele, välistavad nakatatud rakkude mineku apoptoosi ja vähendavad viiruse infektsiooni mõju nakatatud raku tsütoskeletile, membraanidele ja biosünteesidele. Selle tulemusena saadakse vektor, mis on kasutatav laia spektri molekulaarbioloogiliste uurimistööde ja biotehnoloogiliste ülesannete tarvis.

projektiga seotud isikud
nr nimi asutus amet  
1.Kaja KiiverTÜ MRIdoktorant 
2.Andres MeritsEesti BiokeskusVanemteadur 
3.Eva ŽusinaiteEBCdoktorant