| teema: | Negatiivse iooni kineetilise energia fokuseerimise kiirendus-pidurdusmeetodi edasine arendamine deprotoneeritud biomolekulaarsete ioonide kõrge lahutusega ITR mass-spektrite registreerimiseks |
|---|---|
| tunnusnumber: | ETF5134 |
| projekti tüüp: | Eesti Teadusfondi grant |
| erialad: |
1.3. Füüsika 1.6. Füüsikaline, analüütiline ja anorgaaniline keemia 2.7. Bio- ja toiduainete tehnoloogia |
| seisund: | lõppenud |
| asutus: | Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituut |
| projekti juht: | Rein Pikver |
| kestus: | 01.01.2002 - 31.12.2004 |
| kirjeldus: | Biomolekulide struktuuri uurimiseks ja fragmentide identifitseerimiseks sekveneerimsel,on vajalik väga suure täpsusega moolkaalu määramine, milleks tuleb uuritavale ioonile saavutada isotooplahutus. Lisaks võimaldab see isotoopide asendamise teel uurida biomolekuli struktuuri väikesi muutusi, kuna isegi valkude väikesed struktuuri muutused võivad olla organismi tõsiste muutuste põhjuseks. Sobivaim meetod ioonidele, nii kergetele kui rasketele, isotooplahutuse saavutamiseks on ITR MS (ioontsüklotronresonants-mass-spektromeetriline) meetod koos MALDI (matrix assisted laser desorption ionization) ionisatsioonimeetodiga.1997 aastal lõpetati KBFI keemilise füüsika laboratooriumis ITR mass-spektromeetri ehitamine, mille aluseks on meie poolt loodud MALDI-genereeritud ioonide kineetilise energia fokuseerimise kiirendus-pidurdusmeetod ja orginaalse konstruktsiooniga ITR rakk, positiivsete ioonide kõrge lahutusega mass-spektrite registreerimiseks. Käesoleval aastal rakendati iooni kineetilise energia fokuseerimise kiirendus-pidurdusmeetodit edukallt negatiivsete ioonide MALDI-FTITR kõrge lahutusega mass-spektrite registreerimiseks. Ooteajaga kiirendamise ja pidurdamise abil võdsustati deprotoneeritud MALDI-genereeritud ioonide energia ja pidurdatud negatiivsete ioonide mass-spektrid registreeriti madalatel lõksustusplaatide pingetel. Läbitöötatud kirjanduse põhjal me leidsime, et peptiidi substance P ja valgu insuliini B-ahela kõrge lahutusega deprotoneeritud ioonide mass-spektreid pole varem registreeritud. Meie eksperimentides saavutati massi lahutus 77 000 ja 51 000 vastavalt substance P (deprotoneeritud mass 1345,720 Da) ja InsuuliiniB-ahela (deprotoneeritud mass 3492,64 Da) jaoks. Proovid valmistati tilga kuivatamise meetodil roostevabast terasest alusele, kasutades vastavalt maatriksit DHB ja DHBs. Esialgsed eksperimendid näitasid suurt potentsiaali meie kiirendus-pidurdusmeetodi rakendamisel negatiivsete ioonide kõrge lahutusega mass spektrite registreerimisel. Seetõttu metoodika ja aparatuuri täiustamine käesoleva granti raames loob võimalused biomolekulide struktuuri paremaks uurimiseks. |
| projektiga seotud isikud | ||||
|---|---|---|---|---|
| nr | nimi | asutus | amet | |
| 1. | Rein Pikver | Keemilise ja Bioloogilise Füüsika Instituut | vanemteadur | |
| 2. | Juhan Subbi | KBFI | vanemteadur | |