| teema: | Peptiidi kiipide tehnoloogia väljaarendamine proteiini kinaaside aktiivsuste selektiivseks määramiseks |
|---|---|
| tunnusnumber: | ETF5479 |
| projekti tüüp: | Eesti Teadusfondi grant |
| erialad: |
1.6-1.9. Keemia ja molekulaarbioloogia |
| seisund: | käimasolev |
| asutus: | TÜ Füüsika-keemiateaduskond |
| projekti juht: | Mart Loog |
| kestus: | 01.01.2003 - 31.12.2006 |
| kirjeldus: | Peptiidi kiibid (peptide chips) on innovaatiline tehnoloogia, mis võib peagi asendada ravimite väljatöötamisel, diagnostikas ja rakubioloogias siiani kasususel olevaid bioanalüütilisi meetodeid. Käesolev projekt keskendub peptiidi chipi strateegia väljaarendamisele, mille eesmärgiks on erinevate proteiini kinaaside aktiivsuste selektiivne määramine rakulüsaatides ja suure läbilaskevõimega kineetilise mõõtmismetoodika loomine proteiini kinaaside inhibiitorite analüüsiks. Strateegia baseerub, esiteks, taotleja poolt väljatöötatud mass spektromeetriat kasutaval kombinatoorse keemia meetodil, mis on mõeldud proteiini kinaaside spetsiifilisuse detailseks analüüsiks ja uute peptiidsubstraatide ratsionaalseks disainiks, ning teiseltpoolt, uudsel peptiidi chipi tehnoloogial, mis kasutab alkaantiolaatidest moodustuvaid monokihte kuld-substraadi pinnal. Projekti peamised etapid hõlmavad endas valitud mudel kinaaside spetsiifilisuse määramist kombinatoorse keemia meetoodil, uute selektiivsete peptiidsubstraatide disaini ja kineetilist analüüsi. Seejärel immobiliseeritakse uued sünteesitud peptiidid miniatuursete ridadena chipi pinnale kasutades selektiivset immobiliseerimisprotokolli, mis põhineb Diels-Alderi reaktsioonil. Chipile immobiliseeritud peptiidide fosforüleerimisreaktsioon optimiseeritakse kasutades puhastatud proteiini kinaase kui ka endogeenseid proteiini kinaase sisaldavaid rakulüsaate. Sealjuures keskendutakse mitmete tehniliste aspektide ja parameetrite analüüsile ning optimiseerimisele, kaasaarvatuna peptiidide immobiliseerimise tihedus, signaali erinevad võimendusmeetodid, kvantitatiivsus, müra effektid ja kui kinaaside määramise tundlikkus. |
| projektiga seotud isikud | ||||
|---|---|---|---|---|
| nr | nimi | asutus | amet | |
| 1. | Aleksei Kuznetsov | TÜ, Keemia Osakond | magistrant | |
| 2. | Mart Loog | TÜ Füüsika-keemiateaduskond | vanemteadur | |
| 3. | Nikita Oskolkov | TÜ, Keemia Osakond | magistrant | |