| teema: | Uute mikroobsete süsteemide väljatöötamine ja testimine võõrvalkude ekspressiooniks |
|---|---|
| tunnusnumber: | ETF5676 |
| projekti tüüp: | Eesti Teadusfondi grant |
| erialad: |
1.9. Geneetika, füsioloogia ja mikrobioloogia 2.7. Bio- ja toiduainete tehnoloogia |
| seisund: | käimasolev |
| asutus: | TÜ Bioloogia-geograafiateaduskond |
| projekti juht: | Tiina Alamäe |
| kestus: | 01.01.2004 - 31.12.2007 |
| kirjeldus: | Töö eesmärgiks on võõrvalkude ekspressiooniks kasutatavate uute mikroobitüvede ja plasmiidsete vektorite väljatöötamine. Metülotroofseid pärme (Hansenula polymorpha, Pichia pastoris) kasutatakse aktiivselt biotehnoloogiliselt oluliste produktide (ensüümid, vaktsiinid jne) tootmiseks. H. polymorpha abil toodatakse hepatiidi B pinnaantigeene vaktsiiniks, fütaasi loomade söödalisandiks, vere antikoagulanti hirudiini jne. Ekspressioonikonstruktides juhitakse võõrvalgu sünteesi peamiselt alkoholi oksüdaasi promootoriga. Meie poolt kirjeldatud H. polymorpha maltaasi geeni promootoril on biotehnoloogiliselt atraktiivne: tal on hea ekspressioon nii eu- kui ka prokarüootses rakus ning reguleeritavus süsinikuallikaga söötmes. Soovime detailselt uurida maltaasi promootori omadusi ning rakendusvõimalusi heteroloogiliste valkude ekspressioonil nii pärmides kui ka E. coli's. Jälgime promootori ekspressiooni erinevates H. polymorpha metsiktüvedes ning mutantides ning võrdleme selle promootori tugevust teiste H. polymorpha promootoritega. Konstrueerime ekspressiooniplasmiidi, mis oleks võimeline replitseeruma nii pärmides (H. polymorpha ning S. cerevisiae) kui ka bakteris E. coli. Plasmiidis kasutame H. polymorpha maltaasi geeni promootorit, mis töötab kõigis kolmes organismis. Uurime ka glükoosi fosforüülivate ensüümide rolli glükoosi repressiooni vahendamisel pärmis H. polymorpha, kasutades selleks heksokinaaside heteroloogilist ekspressiooni. Katkestame S. cerevisiae transkriptsioonilise repressori MIG1 geeni homoloogi pärmis H. polymorpha, eeldusega luua biotehnoloogiliselt atraktiivne peremeestüvi heteroloogiliste geenide ekspressiooniks. Uurime H. polymorpha maltaasi geeni regulatsiooni S. cerevisiae MAL geenide regulaatorvalkudega, et võrrelda geeniekspressiooni regulatsiooni neis kahes pärmis. |
| projektiga seotud isikud | ||||
|---|---|---|---|---|
| nr | nimi | asutus | amet | |
| 1. | Tiina Alamäe | TÜ Bioloogia-geograafiateaduskond | dotsent | |
| 2. | Helen Karp | MRI | ||
| 3. | Katrin Viigand | MRI | ||