| kirjeldus: |
Kavandatud töö on seotud selliste CD44 ja PTCH-GLI raja valkude funktsiooni uurimisega, mis osalevad vähi tekkes ja arengus. Oleme näidanud, et rekombinantne CD44 valk, omades angiogeneesi inhibeerivat toimet, võib olla aluseks uudse vähiravimi loomisel. Samuti oleme leidnud, et GLI1 valk võib olla nii potentsiaalseks diagnostiliseks markeriks kui ka vähiravimite märklauaks. Seega võib GLI1 vastaseid antikehi potentsiaalselt kasutada nii vähiteraapias kui ka vähidiagnostikas. Bioloogilisteks ja hilisemateks kliinilisteks katseteks on vaja antud valke suuremas mahus ning ka natiivsel kujul. Nende valkude saamiseks natiivsel kujul tuleb kasutada imetajarakke-produtsente. Kuna oleme eelnevalt leidnud, et imetajarakud on võimelised kasvama pärmiekstrakti kui kasvufaktori juuresolekul seerumita söötmes, siis on antud projekti kandvaks uurimissuunaks pärmiekstrakti mõju uurimine kultiveeritavatele imetajarakkudele. Käesoleva töö eesmärkideks on: 1) pärmiekstrakti mõju uurimine imetajarakkudele, optimeerimaks rekombinantsete valkude ja antikehade tootmist laboratoorsel tasemel; 2) uute odavamate seerum-ja valguvabade söötmete väljatöötamine; 3) erinevate pärmiekstrakti preparaatide mõju võrdlev uurimine; 4) bakterites, putuka-ja imetajarakkudes ekspresseeritud rekombinantsete valkude ja antikehade puhastamistehnoloogia väljatöötamine ja optimeerimine. Töös uuritakse pärmiekstrakti sisaldavatel seerumvabadel söötmetel kasvavate imetajarakkude kasvuparameetreid (kasvukiirus, eluvõimelisus, rakutsükkel jt. ) ja võõrvalkude ekspressioonitaset. Uuritakse pärmiekstrakti mõju rakkude proliferatsioonile, pikemaajalisele kasvuvõimele ning apoptoosile. Proovime identifitseerida pärmiekstraktis rakkude kasvu initsieerivaid ja inhibeerivaid faktoreid, mis võimaldaksid kontrollida putuka-ja imetajarakkude kasvukiirust, rakutihedust ja võõrvalkude produktsiooni kultuuris. Bioloogilisteks ja kliinilisteks katseteks kasutatavate rekombinantsete valkude puhastamiseks kombineeritakse ioonvahetuse ja hüdrofoobset kromatograafiat ning geelfiltratsiooni. Üheastmelisi puhastusmetoodikaid kasutatakse sisestatud järjestusega (tag) liitvalkude puhul. |